未使用的胰島素應冷藏。未開封使用過的胰島素藥瓶或者胰島素筆芯應盒裝儲存於2℃至8℃的冰箱內，但是千萬要注意胰島素決不可以冷凍，放在冰箱的冷藏箱也不要太接近冰格，因為胰島素冰凍後會變性，從而失去生物活力。
胰島素也不應受熱或陽光照射。暴露在陽光下或放在溫度較高的地方會引起胰島素活力損失。如果外出旅行，可以將胰島素裝在專用的盒子裡，到達目的地後再放入冷藏箱中，若沒有冰箱則應放在陰涼之處。乘飛機旅行時，胰島素應隨身攜帶，千萬不可隨行李托運，因為托運艙與外界相通，溫度可至零攝氏度以下，造成胰島素冰凍變性。
使用中的胰島素要室溫保存。在室溫下（最高25℃）胰島素可保存4—6個星期(不同廠家的胰島素可能在室溫下穩定存放的時間略有不同，以說明書標示的實際時間為准)，所以開封使用後的胰島素不必放入冰箱冷藏，反復的劇冷劇熱更易造成胰島素的變性。
特別是不能將裝上筆芯的胰島素筆放入冷藏箱，注射後不能反復從冰箱中放入取出，如果針頭未取下，胰島素藥液熱脹冷縮就會吸入空氣形成氣泡，造成注射量不准。所以胰島素筆每次注射後，只需將針頭取下（防止氣溫的變化導致藥液從針頭外溢）室溫保存即可。